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講述FGF-23試劑盒的測試流程
2019-01-22 瀏覽次數：2286
FGF-23試劑盒用于測定血清，血漿及相關液體等樣本，例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。
FGF-23試劑盒的測試流程如下：
1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
2、酶標板置4℃，包被過夜。
3、洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4、陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5、酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。
6、洗板，同4。
7、每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8、酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。
9、洗板，同4。
10、每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應。
12、分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13、數據處理：在得出標本s和陰性對照n的 od值后，計算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標準。
注意用于FGF-23測試的標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
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